期刊简介
本刊主要反映本院及有关兄弟院校教学、科研、医疗的理论性学术刊物，刊登医药卫生方面的学术研究论著、临床经验、病例报告、文献综述等。
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首页>锦州医科大学学报杂志
- 杂志名称：锦州医科大学学报杂志
- 主管单位：辽宁省教育厅
- 主办单位：锦州医科大学
- 国际刊号：1674-0424
- 国内刊号：21-1606/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 维普收录(中)
新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核细胞载体的构建和鉴定
张正；刘丹平；陈峻江；郭韬；张男
关键词：骨形态发生蛋白2基因, 绿色荧光蛋白, 腺病毒载体, 同源重组, 成骨诱导
摘要：目的 构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生蛋白2(BMP2)目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白(GFP)的新型腺病毒真核细胞表达载体.方法将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识别位点Xho Ⅰ的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1.携带BMP2+基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴定、Pme Ⅰ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌,利用细菌内同源重组机制将BMP2+和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒.用Pac Ⅰ酶切去除其质粒成分,暴露腺病毒基因组的反向末端重复序列,转染293细胞,进行腺病毒的包装,完成新型腺病毒载体Ad CMV-BMP2+-IRES-GFP-1的构建.作为阳性对照,同时制备多年来广为应用的BMP2腺病毒表达载体Ad CMV-BMP2.以两种载体感染骨髓基质细胞,通过RT-PCR和荧光显微镜分别检测骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白表达情况;通过碱性磷酸酶活性检测判断BMP2诱导成骨分化作用.结果突变后骨形态发生蛋白2基因序列、重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒质粒酶切图谱符合预定设计.感染骨髓基质细胞后,新型腺病毒载体可同时表达报告分子GFP和具有诱导成骨分化活性的BMP2.结论成功构建表达BMP2的新型腺病毒载体.
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